Recombinant Mouse Eotaxin

  2． 每100mg固体安排置于培育皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，参加0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，留意低温操作；

  3． 取安排匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；

  4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

  1． 贴壁培育的细胞，吸去培育基后，参加10mL/150mm培育板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培育液；

  2． 悬浮培育的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培育液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培育板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；

  4． 细胞洗刷后，转至新的预冷的离心管中，参加上述制造好的冷Lysis Buffer，

  构建表达载体： 将基因克隆到表达载体中，一般挑选比较合适表达宿主细胞的载体。这个载体一般包含启动子、操纵子和挑选符号，以便在宿主细胞中表达和挑选。

  宿主细胞转化： 将构建好的表达载体导入宿主细胞中。一般，哺乳动物细胞是的宿主细胞。

  培育和诱导表达： 在含有抗生素的培育基中培育转化细胞，直到到达恰当的细胞培育密度。然后，增加表达诱导剂和牛血清，以诱导蛋白的表达。

  细胞破碎和蛋白质提取： 搜集细胞并对其进行破碎，以开释蛋白质。蛋白质提取一般包含离心、超滤或其他办法。

  蛋白质剖析： 运用蛋白质剖析仪器，如SDS-PAGE凝胶电泳或Western blot，来查看蛋白的纯度和分子量。

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